反相高效色譜柱的衝洗再生方法

通常情況下，對於(yu) 常用的反相色譜柱出現了嚴(yan) 重的柱效降低、分離度差時，可以試試按照以下流程來對色譜柱進行衝(chong) 洗、再生：
1、20倍柱體(ti) 積水：乙腈= 95%：5% （用於(yu) 移除係統中緩衝(chong) 鹽，可根據常用緩衝(chong) 鹽濃度調整比例）
2、20倍柱體(ti) 積 乙腈
3、5倍柱體(ti) 積 異丙醇
4、20倍柱體(ti) 積 正己烷
5、20倍柱體(ti) 積 乙腈
6、20倍柱體(ti) 積 水：乙腈=95%：5% （可與(yu) 步驟1保持相同的比例）
7、用所需的流動相比例重新平衡色譜柱
關(guan) 於(yu) 色譜柱的衝(chong) 洗再生，基本上都是個(ge) 性化的，也有很多相關(guan) 文章，每支色譜柱的實際情況都會(hui) 有所不同，適的再生條件需要經過實際摸索和調整。
在色譜柱衝(chong) 洗時，很多實驗室習(xi) 慣用衝(chong) 洗時間來評價(jia) 是不是達到我們(men) 想要的效果。例如某位師傅告訴你把這個(ge) 柱子衝(chong) 半個(ge) 小時就可以了。嚴(yan) 格來講色譜柱的衝(chong) 洗應該使用衝(chong) 洗的溶劑體(ti) 積來評價(jia) 衝(chong) 洗效果，柱體(ti) 積的計算公式如下：


例如一根4.6mm內(nei) 徑，150mm柱長的色譜柱柱體(ti) 積為(wei) ：


如果要用20倍柱體(ti) 積的乙腈衝(chong) 洗色譜柱就需要約34mL的乙腈，假設柱流量是1mL/min，那就要用乙腈衝(chong) 洗34分鍾，當柱流量是1.5 mL/min時就需要用乙腈衝(chong) 洗約23分鍾。